測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA)1ml
BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)5000次
BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)500次
BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)200次
BCA蛋白濃度測定試劑盒5000次
BCA蛋白濃度測定試劑盒500次
BCA蛋白濃度測定試劑盒200次
Western及IP細(xì)胞裂解液100ml
RIPA裂解液(強)100ml
RIPA裂解液(中)100ml
RIPA裂解液(弱)100ml
RIPA裂解液(強中弱套裝)共150ml
NP-40裂解液100ml
SDS裂解液100ml
Western及IP細(xì)胞裂解液(無抑制劑)100ml
RIPA裂解液(強，無抑制劑)100ml
細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 50次
細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒100次
細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒100次
細(xì)胞線粒體分離試劑盒50-100次
組織線粒體分離試劑盒50-100次
紅細(xì)胞裂解液120ml
細(xì)胞與組織裂解液(一氧化氮檢測用)100ml
PMSF(100mM)10ml
BeyoGoldTM His-tag Purification Resin10ml
BeyoGoldTM His-tag Purification Resin100ml