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細胞培養(yǎng)操作步驟
點擊次數(shù):1497 更新時間:2016-04-20

一、原代細胞的培養(yǎng)

   1.紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈,開啟超凈臺正常工作狀態(tài),用酒精消毒操作者的雙手。

   2.將所需的培養(yǎng)基確保瓶身干凈后放于工作臺面內(nèi),點燃酒精燈,將培養(yǎng)基瓶口用酒精棉球擦拭后,再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次,旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋,分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上,瓶口對準酒精燈,且放在距離酒精燈zui近的位置,瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。

   3.1個高壓后的新培養(yǎng)瓶,瓶口在酒精燈上消毒2-3次,旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次分別放于酒精燈兩側(cè),把保種管在超凈臺外用酒精棉球擦拭下2/3后拿進超凈臺內(nèi)在酒精燈上消毒保種管口2-3次放于臺面左手邊,1ml移液器快速移動在酒精燈上消毒1-2次,然后再裝上槍頭吸取保種管內(nèi)的細胞液,懸空移入培養(yǎng)瓶內(nèi)。

   4.拿出1支高壓后的5ml定量移液管,在酒精燈上灼燒尾部后裝于電動移液器上,再次放于酒精燈上灼燒整個定量移液管管身2-3次,懸空進入培養(yǎng)基瓶內(nèi)吸取4ml培養(yǎng)基再懸空移入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶瓶口和瓶蓋在酒精燈上消2-3次后擰緊平放,在瓶身做好實驗標記。

  5.將培養(yǎng)基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊,熄滅酒精燈,整理實驗臺面,取出實驗試劑及污缸等,關(guān)閉超凈工作臺。

  6.將培養(yǎng)瓶放于28,5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),旋開瓶口少許。

注意整個培養(yǎng)箱底托盤內(nèi)一定要放高壓后的水,且定期更換確保無菌。

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