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本公司代理ATCC細(xì)胞，提供Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存售前售后一條龍服務(wù)，若要獲取詳細(xì)的說(shuō)明書(shū)或價(jià)格信息，點(diǎn)擊了解更多腫瘤細(xì)胞。

細(xì)胞名稱(chēng)  Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存
形態(tài)特性 上皮樣

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418

傳代方法 1:2~1:4傳代；每周2~3次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng)：
1.收到Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)絡(luò)。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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100克Phenylalanine Deaminase Medium苯瓊脂培養(yǎng)基

250克Pseudomonas Agar P假單胞P瓊脂

250克Pseudomonas Agar F假單胞F瓊脂

10克Dulcitol Semisolid Agar衛(wèi)矛醇半固體瓊脂

250克NO.4 Agar Base號(hào)瓊脂

250克Wagstsuma Agar Base我妻氏血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)

250克L Nac1 Peptone Water60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯

250克42℃ Growth Medium42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基

TG  兔抗甲狀腺球蛋白   規(guī)格 0.1ml*

TFR2/Transferrin Receptor 2  轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2抗體   規(guī)格 0.2ml*

TFPI-2  組織因子途徑抑制劑-2抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF3  三葉肽因子3抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF2  三葉肽因子2抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFF1/BCEI  癌雌激素誘導(dǎo)蛋白抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFEB  T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體   規(guī)格 0.1ml*

TFE3  轉(zhuǎn)錄因子E3   規(guī)格 0.1ml*

TFDP3  轉(zhuǎn)錄因子DP3抗體（肝癌相關(guān)抗原661）   規(guī)格 0.2ml*

TFDP2/DP2  轉(zhuǎn)錄因子E2F二聚體蛋白2抗體   規(guī)格 0.2ml*

TFCP2C  轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體   規(guī)格 0.2ml*
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse anti-rat IgG ascites  小鼠抗大鼠IgG腹水   規(guī)格 1ml*

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG   規(guī)格 1mg*

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 2ml*

Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgM   規(guī)格 0.1ml*

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-546保存在運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，因此客戶(hù)在收到貨以后的*時(shí)間是要先觀(guān)察產(chǎn)品的狀況，顯微鏡下觀(guān)察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要立即打開(kāi)培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱過(guò)夜，并于次日在顯微鏡下觀(guān)察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)?jiān)囍门_(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理；如若證實(shí)細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)?jiān)谑盏截浐?8小時(shí)內(nèi)將細(xì)胞狀態(tài)反饋給我公司，我們將盡快幫助解決。