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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠滋養(yǎng)層干分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤組織細(xì)胞的祖細(xì)胞，與胚胎著床和胎盤的形成密切相關(guān)。胚胎著床和胎盤形成是母體與胎兒建立聯(lián)系的關(guān)鍵時(shí)期，此時(shí)期滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖速度快，滋養(yǎng)層干細(xì)胞自我更新和分化旺盛，與多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及其增殖、功能調(diào)節(jié)的失常有密切關(guān)系。在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育過(guò)程中，胚胎細(xì)胞次分化形成內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)外胚層。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤細(xì)胞的前體細(xì)胞，在胎盤發(fā)育中有重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠滋養(yǎng)層干采用囊胚組織貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠滋養(yǎng)層干經(jīng)HLA-E（白細(xì)胞抗原）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測(cè)試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠仙臺(tái)病毒(Sendai)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測(cè)試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickenheparansulfate,HS檢測(cè)試劑盒雞類肝素(HS)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應(yīng)蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) ADI

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。