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細胞簡介：

小鼠小腸黏膜上皮分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內(nèi)分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細胞的收縮是負責(zé)腸蠕動的動力，促使食物向下運動。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠小腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠小腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

a10(MAPK10)檢測試劑盒 ，英文名： MAPK10 ELISA Kit

Mouse omein ELISA Kit (omein) 小鼠網(wǎng)膜素(omein)檢測試劑盒

Ratesogen,EELISAKit 大鼠雌激素(E)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHGV-IgM(HumanHepatitisGvirusIgG)ELISAKit人庚型肝病毒IgM

細胞SGK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPCⅠ大鼠Ⅰ型前膠原

SERPINE1重組大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CRP (C-reactive protin 0.5mgCRP (C-reactive protin) C-反應(yīng)蛋白(抗原)

IGFBP7重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 Protein

DKKL1 Protein Human 重組人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 蛋白 (Fc 標簽)

SERPINA7 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA7 / TBG 蛋白

CRP (C-reactive protin 0.5mgCRP (C-reactive protin) C-反應(yīng)蛋白(抗原)

DKKL1 Protein Human 重組人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 蛋白 (Fc 標簽)

SERPINE1重組大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

SERPINA7 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA7 / TBG 蛋白

IGFBP7重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 Protein

小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai IgE receptor aibody ELISA Kit 大鼠抗IgE受體抗體檢測試劑盒

Humanfetalhemoglobin,HBFELISAKit 人胎兒血紅蛋白(HBF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2檢測試劑盒人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氨含量熒光定量檢測試劑盒20次

Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit小鼠16α羥基雌同1(16-αOHE-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠小腸黏膜上皮細胞小鼠琥珀酸脫氫酶檢測試劑盒   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒、小鼠琥珀酸脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

大鼠Ⅷ相關(guān)抗原檢測試劑盒   大鼠Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒、大鼠Ⅷ相關(guān)抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

大鼠抗復(fù)合物檢測試劑盒   大鼠抗復(fù)合物試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠抗復(fù)合物試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠抗復(fù)合物試劑盒、大鼠抗復(fù)合物eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

大鼠型纖溶酶原激活物受體檢測試劑盒   大鼠型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠型纖溶酶原激活物受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠型纖溶酶原激活物受體試劑盒、大鼠型纖溶酶原激活物受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。